Mitotische Histon H3/H4 Modifikationen und Varianten

Eukaryotische DNA des Zellkerns ist in große Strukturen verpackt die Chromatin genannt werden. Die Grundeinheit dieser Struktur ist das Nukleosom, welches aus DNA besteht die um die Histon-Proteine H2A, H2B, H3 und H4 gewickelt ist. Zahlreiche chemische Modifikationen dieser Histone sind bekannt und es wird angenommen daß diese großen Einfluß auf alle Aspekte der Chromatinphysiologie besitzen. Weil Histon- codierende Gene essenziell sind, von vielen Genkopien exprimiert werden, und ihre genetische Manipulation pleiotropische Phänotypen zur Folge haette, ist die genetische Analyse der Histone beinahe unmöglich. Aus diesem Grunde sind die direkten Funktionen der Histonmodifikationen noch unbekannt. Hier beschreibe ich einen neuen, auf Xenopus laevis Eiextrakten basierenden Ansatz der diese Probleme umgeht. Diese Eiextrakte erlauben die biochemische Rekonstitution des Chromosomenyzklus in vitro. Die neu entwickelte Methode ermöglicht mir H3 und H4 aus diesen Extrakten zu entfernen. Durch Rückzuführung von wild-typ oder mutierten Versionen von H3 und H4 die nicht mehr modifiziert werden koennen, werde ich den Einfluß dieser Modifikationen auf die Kernteilung analysieren. Des weiteren werde ich die biochemischen Konsequenzen dieser Modifikationen untersuchen. Mit diesen Experimenten hoffe ich ein mechanistisches Verständnis zu erlangen, welches zur Klaerung der Mitose-Regulation durch Histone beitragen soll.