Forschungsprojekt P 14591Analyse der Zellphysiologie von rekombinanten E. coli ZellenNicole
BORTH26.06.2000
Die starke Überexpression rekombinanter Proteine bewirkt eine starke Stoffwechselbelastung für die Wirtszelle. Da
Zellpopulationen in der Regel nicht homogen auf eine derartige Stresssituation reagieren, kann ein klareres Bild
über die physiologischen Vorgänge mit Hilfe der Durchflußzytometrie gewonnen werden, wobei mehrere
Parameter in Einzelzellen gleichzeitig gemessen werden können, und auch die Verteilung dieser Parameter, und
ihrer Kombinationen, in der Gesamtpopulation dargestellt werden kann. Im Zuge des FWF-Projektes P 12271 -
MOB wurden Methoden für die simultane Messung von Gesamt-DNA, Gesamtprotein und spezifischem
rekombinantem Protein in Bakterien entwickelt. Für diese Methoden ist es notwendig, daß die Zellen vor der
Färbung fixiert werden, sodaß keine Daten über die Vitalität der Zellen gewonnen werden können.
Das Ziel dieser Projektverlängerung ist es nun, die Entwicklung der Zellvitalität in Konsequenz der durch
Überexpression verursachten Stoffwechselbelastung zu bestimmen. Die erwarteten Ergebnisse können Aufschluß
darüber geben, wie sich die Vitalität über die Zeit und in ihrer Verteilung innerhalb der Kultur verändert, und wie
die Vitalität mit anderen Parametern wie Zellgröße und DNA-Gehalt zusammenhängt.