Erwin-Schrödinger-Stipendium J 1994Selektion der minimalen ribosomalen Peptidyl TransferaseNorbert
POLACEK09.10.2000
Ziel dieses Projektes ist es, die minimalen Komponenten des ribosomalen Peptidyl Transferasezentrums zu
isolieren und zu zeigen, dass protein-freie 23S rRNA katalytisch aktiv ist. Das aktive Zentrum der
Peptidyltransferase ist in der großen ribosomalen Untereinheit lokalisiert, wobei allerdings die molekulare
Zusammensetzung bis dato nicht bekannt ist. Viele Studien deuten auf eine besondere Wichtigkeit der 23S rRNA
für die katalytische Aktivität hin und es erscheint wahrscheinlich, dass die Peptidbindung ein rRNA-katalysierter
Prozess ist (Ribozym). Verständnis der Funktionsweise des Ribosoms ist von fundamentaler molekularbiologischer
Relevanz.
Entscheidende Erkenntnisse über die wesentlichen Komponenten des Peptidyltransferasezentrums wurden kürzlich
im Mankin Labor gemacht. Es konnte gezeigt werden, dass proteinextrahierte groBe ribosomale Untereinheiten von
Thermus aquticus katalytisch aktiv blieben, obwohl sie neben der 23S und 5S rRNA nur noch 8 ribosomale
Proteine besaßen. Ziel dieses Projekts ist es nun, diese letzten Proteine eines nach dem anderen zu eliminieren und
auf 23S rRNA Mutanten zu selektieren, die den Verlust des Proteins kompensieren k6nnen. Dafür soll die kürzlich
entwickelte in vitro Rekonstitutionsmethode und die Methode der in vitro Selektion (SELEX) zur Anwendung
kommen.