Baculovirus-Oberflächenexpression

Die Relevanz, sowie die Vielzahl der Anwendungsmöglichkeiten von Oberflächendisplay-Libraries als Werkzeug für die Entwicklung in Diagnostik und Klinik machte sich in den letzen Jahren deutlich. Prokaryontische "Phagen- display-Systeme" ermöglichen es, maßgeschneiderte Liganden aus Pools von möglichen Bindern zu isolieren, welche als Fusionproteine mit dem Phagenhüllprotein an viralen Oberflächen exprimiert werden. Auf diese Weise kann das Auffinden eines gewünschten Proteins mittels Anreicherungstechniken ("Panning") sehr schnell durchgeführt werden, und das dafür codierende Gen isoliert, beziehungsweise sequenziert werden. Limitationen dieser Strategien ergeben sich, wenn es sich um komplexe, eukaryontische Proteine handelt, die im bakteriellen Expressionssystem nicht entsprechend prozessiert werden können (Glykosylierung, Faltung, Assembly). Ein attraktives Expressionssystem für eukaryontische Proteine, ist das Insektenzell-Baculovirus-Expressionssystem. Im Zuge unserer bisherigen Arbeiten, verglichen wir verschiedene Baculoviruskonstrukte im Hinblick auf ihre Expression von Fremdproteinen auf der Virusoberfläche, sowie auch auf der Oberfläche von infizierten Insektenzellen. Ziel dieses Projektes ist es, durch Optimierung des Baculovirus-Oberflächen-Expressionssystems, einen wichtigen Beitrag zur Ligandentechnologie allgemein leisten zu können. Im Laufe dieses Projektes ist geplant die zu verwendende Klonierungsstrategie weiter zu verbessern, sowie den relativen Anteil des Zielproteins an der Virusoberfläche zu erhöhen. Am Beispiel einer Epitop-Library (HIV-1-gp160) einerseits und einer cDNA- Library (Maus-Hypophyse) andererseits wollen wir die Möglichkeit große Libraries komplexer, eukaryontischer Proteine herzustellen, testen. Die Kombination aus optimierten Viruskonstrukten, gemeinsam mit effizienten Selektionsprotokollen (FACS) soll zur Etablierung eines leicht anwendbaren Expressions- und Selektionssystems führen. Anhand geeigneter Beispiele soll die Nützlichkeit und Flexibilität dieses Systems demonstriert werden.