Enzymologie des Xylosemetabholismus in Hefe - Xylosereduktase
Enzymology of xylose metabolism in yeast - xylose reductase
Wissenschaftsdisziplinen
Biologie (80%); Chemie (20%)
Keywords
-
XYLOSE REDUCTASE,
KINETIC AND CHEMICAL MECHANISM,
ALDO/KETO REDUCTASE,
PROTEIN ENINEERING,
DIMER STRUCTURE,
X-RAY CHRYSTALLOGRAPHY
Die Richtlinien der Europäischen Kommission stellen fest, dass bis zum Jahr 2010 Motorentreibstoffe mindestens 5.75% Biotreibstoff enthalten sollen. Es ist notwendig, bestehende Biotechnologien hinsichtlich ihrer Produktivität und Kosteneffizienz zu verbessern, um dieses Ziel zu erreichen. Ethanol ist neben Biodiesel der vielversprechendste Biotreibstoff der Zukunft für bestehende Automobiltechnologien. Er wird durch biologische Konversion unter Ausschluss von Sauerstoff, dem Prozess der mikrobiellen Fermentation, gewonnen. Unter den möglichen Rohstoffen für die Herstellung von Ethanol ist Lignocellulose in erneuerbarer pflanzlicher Biomasse von herausragender Bedeutung. Lignocellulose besteht aus den Polysacchariden Zellulose und Hemizellulose sowie Lignin und findet sich in riesigen Mengen in Abfällen aus der Land- und Forstwirtschaft und der Papier- und Zellstoffindustrie. Techno-ökonomische Analysen haben gezeigt, dass die wirtschaftlich sinnvolle Verwertung von Lignocellulose durch biotechnologische Prozesse davon abhängt, dass sowohl Zellulose als auch Hemizellulose in wertgesteigerte Produkte überführt werden. Während Glukose, der Grundbaustein von Zellulose, leicht zu Ethanol umgesetzt werden kann, stellt die Fermentation der Xylose, die Hauptkomponente von Hemizellulose, ein Problem dar, welches an der Grenzfläche von mikrobieller Physiologie und Prozesstechnik angesiedelt ist. Die klassische Bäcker- oder Brauereihefe kann Xylose nicht vewerten, ausser es werden dem Organismus durch molekularbiologische Methoden zusätzliche metabolische Fähigkeiten verliehen. Trotzdem produzieren "Designerstämme" wenig Ethanol und akkumulieren viele Nebenprodukte. Das Hauptproblem der ungenügenden Prozesseffizienz liegt darin, dass Redoxkofaktoren NAD und NADP während der Assimilierung der Xylose nicht rezykliert werden und damit eine Stresssituation für die Zelle erzeugt wird. Dieses Projekt hat sich mit jenem Enzym auseinandergesetzt, welches ursächlich für die genannte Problematik verantwortlich ist: Xylosereduktase. Die Resultate, welche aus einem Ansatz der biochemisch grundlagenorientiert war und eine intensive Kooperation mit einer kalifornischen Forschergruppe beinhaltete, hervorgegangen sind, führen zur Klärung der Funktionsweise des Enzyms und seiner Spezifitäten. Sie erlaubten die gezielte Herstellung von veränderten Enzymen mit verbesserten technologischen Eigenschaften und stellen die Basis für neue Projektansätze dar.
- Technische Universität Graz - 100%
Research Output
- 467 Zitationen
- 16 Publikationen
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2008
Titel Mechanistic differences among retaining disaccharide phosphorylases: insights from kinetic analysis of active site mutants of sucrose phosphorylase and a,a-trehalose phosphorylase DOI 10.1016/j.carres.2008.01.029 Typ Journal Article Autor Goedl C Journal Carbohydrate Research Seiten 2032-2040 -
2007
Titel Acid–base catalysis in Leuconostoc mesenteroides sucrose phosphorylase probed by site-directed mutagenesis and detailed kinetic comparison of wild-type and Glu237?Gln mutant enzymes DOI 10.1042/bj20070042 Typ Journal Article Autor Schwarz A Journal Biochemical Journal Seiten 441-449 Link Publikation -
2005
Titel Engineering Candida tenuis Xylose Reductase for Improved Utilization of NADH: Antagonistic Effects of Multiple Side Chain Replacements and Performance of Site-Directed Mutants under Simulated In Vivo Conditions DOI 10.1128/aem.71.10.6390-6393.2005 Typ Journal Article Autor Petschacher B Journal Applied and Environmental Microbiology Seiten 6390-6393 Link Publikation -
2005
Titel Fine tuning of coenzyme specificity in family 2 aldo-keto reductases revealed by crystal structures of the Lys-274 ? Arg mutant of Candida tenuis xylose reductase (AKR2B5) bound to NAD+ and NADP+ DOI 10.1016/j.febslet.2004.12.063 Typ Journal Article Autor Leitgeb S Journal FEBS Letters Seiten 763-767 -
2005
Titel Electrostatic stabilization in a pre-organized polar active site: the catalytic role of Lys-80 in Candida tenuis xylose reductase (AKR2B5) probed by site-directed mutagenesis and functional complementation studies DOI 10.1042/bj20050167 Typ Journal Article Autor Kratzer R Journal Biochemical Journal Seiten 507-515 Link Publikation -
2005
Titel Probing the substrate binding site of Candida tenuis xylose reductase (AKR2B5) with site-directed mutagenesis DOI 10.1042/bj20050831 Typ Journal Article Autor Kratzer R Journal Biochemical Journal Seiten 51-58 Link Publikation -
2004
Titel The coenzyme specificity of Candida tenuis xylose reductase (AKR2B5) explored by site-directed mutagenesis and X-ray crystallography DOI 10.1042/bj20040363 Typ Journal Article Autor Petschacher B Journal Biochemical Journal Seiten 75-83 Link Publikation -
2003
Titel Crystal structure of Pseudomonas fluorescens mannitol 2-dehydrogenase: evidence for a very divergent long-chain dehydrogenase family DOI 10.1016/s0009-2797(02)00218-1 Typ Journal Article Autor Kavanagh K Journal Chemico-Biological Interactions Seiten 551-558 -
2003
Titel The xylose reductase (AKR2B5) structure: homology and divergence from other aldo–keto reductases and opportunities for protein engineering DOI 10.1016/s0009-2797(02)00211-9 Typ Journal Article Autor Wilson D Journal Chemico-Biological Interactions Seiten 515-521 -
2003
Titel Altering dimer contacts in xylose reductase from Candida tenuis by site-directed mutagenesis: structural and functional properties of R180A mutant DOI 10.1016/s0009-2797(02)00213-2 Typ Journal Article Autor Klimacek M Journal Chemico-Biological Interactions Seiten 523-532 -
2003
Titel Pseudomonas fluorescens mannitol 2-dehydrogenase and the family of polyol-specific long-chain dehydrogenases/reductases: sequence-based classification and analysis of structure–function relationships DOI 10.1016/s0009-2797(02)00219-3 Typ Journal Article Autor Klimacek M Journal Chemico-Biological Interactions Seiten 559-582 -
2003
Titel Characterization of recombinant xylitol dehydrogenase from Galactocandida mastotermitis expressed in Escherichia coli DOI 10.1016/s0009-2797(02)00215-6 Typ Journal Article Autor Nidetzky B Journal Chemico-Biological Interactions Seiten 533-542 -
2007
Titel Catalytic mechanism of Zn2+-dependent polyol dehydrogenases: kinetic comparison of sheep liver sorbitol dehydrogenase with wild-type and Glu154?Cys forms of yeast xylitol dehydrogenase DOI 10.1042/bj20061384 Typ Journal Article Autor Klimacek M Journal Biochemical Journal Seiten 421-429 Link Publikation -
2006
Titel Structural and Kinetic Studies of Induced Fit in Xylulose Kinase from Escherichia coli DOI 10.1016/j.jmb.2006.10.068 Typ Journal Article Autor Di Luccio E Journal Journal of Molecular Biology Seiten 783-798 Link Publikation -
2006
Titel Asp-196 ? Ala mutant of Leuconostoc mesenteroides sucrose phosphorylase exhibits altered stereochemical course and kinetic mechanism of glucosyl transfer to and from phosphate DOI 10.1016/j.febslet.2006.06.020 Typ Journal Article Autor Schwarz A Journal FEBS Letters Seiten 3905-3910 Link Publikation -
2014
Titel Acceleration of an aldo-keto reductase by minimal loop engineering DOI 10.1093/protein/gzu021 Typ Journal Article Autor Krump C Journal Protein Engineering, Design & Selection Seiten 245-248 Link Publikation