LEF-1/TCF-1 in IL-4 Expression und Th2 Polarisierung

Allergische Reaktionen werden von Typ 2 T Helfer Zellen (T H 2) dominiert. Das Zytokin Interleukin-4 (IL-4) ist für die Differenzierung von T Zellen zum TH 2 Typ verantwortlich, wird aber auch von diesen sezerniert. Die Expression von IL-4 wird von einer Reihe regulatorischer Elemente gesteuert, die sich zum Großteil in der 5` proximalen Promotorregion von IL4 befinden. Der Wnt Signalweg spielt eine wichtige Rolle bei verschiedenen biologischen Entwicklungsprozessen. Neuere Studien zeigen, dass er auch in der Hämatopoiese von Bedeutung sein könnte. Die Haupteffektoren des Wnt Signalweges sind die beiden high-mobility box Transkriptionsfaktoren lymphoid enhancer binding factor-1 (LEF- 1) und T cell factor-1 (TCF-1). Indem sie gemeinsam mit ß-Catenin an das Sequenzmotiv 5`-CTTTGA / TA / T-3` binden, können LEF-1 und TCF-1 Zielgene aktivieren. Es ist bekannt dass die beiden Faktoren in Abwesenheit von ß-Catenin eine repressive Wirkung haben. Unsere Vorstudien zeigen, dass sich auf dem proximalen IL4 Promotor ein funktionales LEF-1/TCF-1 Bindemotiv befindet, und dass LEF-1 und TCF-1 Expression unterdrückt wird, wenn T Zellen aktiviert oder mit IL-4 stimuliert werden. Darüber hinaus scheint LEF-1 selektiv in TH 1 Zellen der Maus exprimiert zu werden, während TCF-1 in ausdifferenzierten T Zellen überhaupt nicht mehr exprimiert wird. Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass der Wnt Signalweg in die T Zell Aktivierung und/oder die Maturierung von TH Zellen involviert sein könnte. Ziel unseres Projektes wird es daher sein, die Rolle, die LEF-1 und TCF-1 in diesen Prozessen spielen, zu untersuchen. Wir wollen zunächst klären, welche Bedeutung das LEF-1/TCF-1 Bindemotiv im IL4 Promotor für die Regulation von IL4 hat. Mittels realtime PCR, ektopischer Überexpression, small interfering RNA (siRNA), Gelshifts, Chromatin Immunoprezipitation und in vitro TH Differenzierung werden wir danach untersuchen, ob die Regulation von IL4 durch LEF-1/TCF-1 Einfluss auf die TH 2 Polarisierung hat. Ein weiterer Ansatzpunkt unseres Projektes besteht darin, die Mechanismen der Unterdrückung von LEF-1/TCF-1 während T Zell Aktivierung und IL-4 Stimulierung aufzuklären.

Allergische Reaktionen werden von Typ 2 T Helfer Zellen (T H 2) dominiert. Das Zytokin Interleukin-4 (IL-4) ist für die Differenzierung von T Zellen zum TH 2 Typ verantwortlich, wird aber auch von diesen sezerniert. Die Expression von IL-4 wird von einer Reihe regulatorischer Elemente gesteuert, die sich zum Großteil in der 5` proximalen Promotorregion von IL4 befinden. Der Wnt Signalweg spielt eine wichtige Rolle bei verschiedenen biologischen Entwicklungsprozessen. Neuere Studien zeigen, dass er auch in der Hämatopoiese von Bedeutung sein könnte. Die Haupteffektoren des Wnt Signalweges sind die beiden high-mobility box Transkriptionsfaktoren lymphoid enhancer binding factor-1 (LEF-1) und T cell factor-1 (TCF-1). Indem sie gemeinsam mit ß-Catenin an das Sequenzmotiv 5`-CTTTGA / TA / T-3` binden, können LEF-1 und TCF-1 Zielgene aktivieren. Es ist bekannt dass die beiden Faktoren in Abwesenheit von ß-Catenin eine repressive Wirkung haben. Unsere Vorstudien zeigen, dass sich auf dem proximalen IL4 Promotor ein funktionales LEF-1/TCF-1 Bindemotiv befindet, und dass LEF-1 und TCF-1 Expression unterdrückt wird, wenn T Zellen aktiviert oder mit IL-4 stimuliert werden. Darüber hinaus scheint LEF-1 selektiv in TH 1 Zellen der Maus exprimiert zu werden, während TCF-1 in ausdifferenzierten T Zellen überhaupt nicht mehr exprimiert wird. Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass der Wnt Signalweg in die T Zell Aktivierung und/oder die Maturierung von TH Zellen involviert sein könnte. Ziel unseres Projektes wird es daher sein, die Rolle, die LEF-1 und TCF-1 in diesen Prozessen spielen, zu untersuchen. Wir wollen zunächst klären, welche Bedeutung das LEF-1/TCF-1 Bindemotiv im IL4 Promotor für die Regulation von IL4 hat. Mittels realtime PCR, ektopischer Überexpression, small interfering RNA (siRNA), Gelshifts, Chromatin Immunoprezipitation und in vitro TH Differenzierung werden wir danach untersuchen, ob die Regulation von IL4 durch LEF-1/TCF-1 Einfluss auf die TH 2 Polarisierung hat. Ein weiterer Ansatzpunkt unseres Projektes besteht darin, die Mechanismen der Unterdrückung von LEF-1/TCF-1 während T Zell Aktivierung und IL-4 Stimulierung aufzuklären.